外泌體（exosome），特指直徑在40-100nm的盤(pán)狀囊泡。其主要來(lái)源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?，F已證實(shí)可以分泌外泌體的細胞有：肥大細胞、淋巴細胞、樹(shù)突狀細胞、瘤細胞、間充質(zhì)干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長(cháng)與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著(zhù)重要的作用。同時(shí)，不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來(lái)完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據它們的大小和發(fā)生分為三類(lèi)，包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細胞分泌，內含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、細胞因子或遺傳物質(zhì)。來(lái)源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子外泌體作為內源性的天然藥物載體有著(zhù)獨特的優(yōu)勢，表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成。貴陽(yáng)外泌體提取試劑廠(chǎng)家直銷(xiāo)
外泌體的提取、分離方法：超高速離心法。常用的是超高速離心法，該方法是被譽(yù)為分離外泌體的“金標準”。該方法利用離心力從細胞培養液或生物流體獲得外泌體，經(jīng)過(guò)400×g、2000×g、10000×g的低速離心，除去細胞及大的細胞分泌物；較后超高速100000×g離心得到外泌體[12]。超高速離心因操作簡(jiǎn)單，不需要復雜的技術(shù)支持，并且成本相對較低而被普遍使用。但是該方法耗時(shí)、產(chǎn)率低，得到的外泌體的數量和質(zhì)量很大程度上受轉子的類(lèi)型、轉子沉降角度等因素影響，其中較主要的問(wèn)題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體，但也會(huì )有其他的囊泡、蛋白質(zhì)或蛋白和RNA的聚集體。石家莊正規外泌體提取試劑進(jìn)貨價(jià)外泌體提?。翰钏匐x心。差速離心仍然是較常見(jiàn)的外泌體分離技術(shù)之一。
外泌體的提取分離：1、PEG-base沉淀法。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集病毒，現在也被用來(lái)沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì )破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。2、試劑盒提取。近幾年來(lái)，市場(chǎng)上已出現各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過(guò)特殊設計的過(guò)濾器過(guò)濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來(lái)。這些試劑盒不需要特殊設備，隨著(zhù)產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代，提取效率和純化效果逐漸提高，因而逐漸取代超速離心法并推廣開(kāi)來(lái)。有些試劑盒操作簡(jiǎn)便，不用超速離心，同時(shí)可獲得高純度和高回收率的外泌體。
專(zhuān)利申請利用分離培養人尿液來(lái)源細胞并收集培養基來(lái)進(jìn)行體外培養，直接把外泌體從尿液中沉降下來(lái)，無(wú)須分離培養人尿液來(lái)源細胞并收集培養基。人尿液來(lái)源細胞的外泌體的獲取方法，是首先分離培養人尿液來(lái)源細胞并收集培養基，將人尿液來(lái)源細胞的培養基通過(guò)0.22微米濾膜過(guò)濾，以去除大的細胞殘片以及其它雜質(zhì)；然后離心除去細胞器，留取上清；再使用可截留100KD分子量的膜，通過(guò)離心截留上清中的外泌體，截留完成后，使用PBS對膜進(jìn)行洗脫即得到外泌體濃縮液。外泌體的提取、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法。
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心，這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時(shí)，量少。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機構普遍地應用于一些病癥和疾病的無(wú)創(chuàng )診斷。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀。寧波外泌體提取試劑哪家好
外泌體提?。好庖叻蛛x外泌體的原理大多是通過(guò)抗體包被的微球，特異性結合外泌體。貴陽(yáng)外泌體提取試劑廠(chǎng)家直銷(xiāo)
用于外泌體提取的體液收集注意事項：1、抽血技巧。操作要輕柔迅速。試管可翻轉8-10次使樣本與抗凝劑混勻，避免劇烈搖晃?；靹蚝?，將試管固定垂直放置于離心分離器，在頂部記錄抽血的準確時(shí)間，因為抽血與離心之間的時(shí)間間隔可能是一個(gè)影響因素。外泌體在抽血后30分鐘內是比較穩定的，若時(shí)間過(guò)長(cháng)將導致外泌體數量增加。血小板極易因抽血時(shí)的物理因素而并釋放出外泌體，其中包括接觸、壓力、切力。2、抽血時(shí)間。除了血液黏度，體內血液的各項指標在1天中變化很大。生理節律會(huì )對血小板的產(chǎn)生很大的影響。白細胞的募集和循環(huán)系統中促炎細胞和細胞會(huì )隨時(shí)間變化。大量的具有特殊表面分子的微粒也被證明會(huì )隨時(shí)間變化。目前尚無(wú)設計較好的實(shí)驗對證實(shí)不同時(shí)間血液中外泌體的變化，故應在相同的時(shí)間采集樣本。目前飲食是否會(huì )對EV產(chǎn)生影響尚未可知，但是由于脂蛋白可運載RNA且食物的攝取可以影響循環(huán)脂蛋白顆粒的類(lèi)型、數量和作用，故抽血可在較后一次用餐后一段確定的時(shí)間進(jìn)行。貴陽(yáng)外泌體提取試劑廠(chǎng)家直銷(xiāo)